液(ye)相(xiang)色(se)譜峰(feng)拖(tuo)尾(wei)原(yuan)因 HPLC常見(jian)問(wen)題(ti)及(ji)對策(ce)

A、 峰(feng)拖(tuo)尾(wei)
1、篩板(ban)阻塞(sai)（a、反沖(chong)色(se)譜柱 b、更(geng)換進口(kou)篩(shai)板(ban) c、更(geng)換色(se)譜柱）
2、色(se)譜柱塌(ta)陷(xian)（填(tian)充(chong)色(se)譜柱）
3、幹擾峰(feng)（a、使用更(geng)長的(de)色(se)譜柱 b、改(gai)變流動(dong)相(xiang)或更(geng)換色(se)譜柱）
4、流動(dong)相(xiang)PH選擇錯(cuo)誤(wu)  （調(tiao)整PH值。對於堿性(xing)化合物(wu)，低(di)PH值(zhi)更(geng)有(you)利(li)於得到(dao)對稱(cheng)峰(feng)）
5、樣(yang)品(pin)與(yu)填(tian)料表(biao)面(mian)的溶化點發生反(fan)應(ying)（a、加入(ru)離子(zi)對試(shi)劑或堿性(xing)揮發(fa)性(xing)修飾劑b、換柱子(zi)）
B、 峰(feng)前延
1、柱溫(wen)低(di)（升(sheng)高柱溫(wen)）          2、樣(yang)品(pin)溶(rong)劑選擇不(bu)恰當(dang)  （使用流動(dong)相(xiang)作(zuo)為(wei)樣(yang)品(pin)溶(rong)劑）
3、樣(yang)品(pin)過(guo)載(zai)  （降(jiang)低(di)樣(yang)品(pin)含(han)量）  4、色(se)譜柱損(sun)壞  （見A1、A2）
C、 峰(feng)分叉(cha)
1、保護(hu)柱或分析(xi)柱汙(wu)染(ran)圖(tu) （取下保護(hu)柱再(zai)進行分析(xi)。如果必要(yao)更(geng)換保護(hu)柱。如(ru)果分析(xi)柱阻塞(sai)，拆下(xia)來(lai)清(qing)洗。如果問題(ti)仍然(ran)存在，可(ke)能(neng)是(shi)柱子(zi)被(bei)強(qiang)保留(liu)物(wu)質(zhi)汙染(ran)，運(yun)用適(shi)當(dang)的再(zai)生措(cuo)施。如果問題(ti)仍然(ran)存在，入(ru)口(kou)可(ke)能(neng)被(bei)阻塞(sai)，更(geng)換篩板(ban)或更(geng)換色(se)譜柱。）
2、樣(yang)品(pin)溶(rong)劑不(bu)溶於流動(dong)相(xiang)  （改(gai)變樣(yang)品(pin)溶(rong)劑。如(ru)果可(ke)能(neng)采(cai)取流動(dong)相(xiang)作(zuo)為(wei)樣(yang)品(pin)溶(rong)劑。）
D、 峰(feng)變形(xing)
1、樣(yang)品(pin)過(guo)載(zai)  （減(jian)少(shao)樣(yang)品(pin)載(zai)量）
E、 早出(chu)的(de)峰(feng)變形(xing)
1、樣(yang)品(pin)溶(rong)劑選擇不(bu)恰當(dang)  （a、減少(shao)進(jin)樣(yang)體(ti)積(ji) b、運用低(di)極(ji)性(xing)樣(yang)品(pin)溶(rong)劑）
F、 早(zao)出(chu)的(de)峰(feng)拖(tuo)尾(wei)程度大(da)於晚(wan)出(chu)的(de)峰(feng)
1、柱外(wai)效(xiao)應（a、調(tiao)整系統連接(jie)（使用更(geng)短(duan)、內徑更(geng)小的管路(lu)） b、使用小體積的流通(tong)池(chi)）
G、 K’增加時(shi)，脫(tuo)尾(wei)更(geng)嚴(yan)重
1、二級保留(liu)效(xiao)應，反相(xiang)模式（a、加(jia)入三(san)乙(yi)胺(an)（或堿性(xing)樣(yang)品(pin)）b、加(jia)入乙(yi)酸（或酸性(xing)樣(yang)品(pin)）c、加(jia)入鹽(yan)或緩(huan)沖(chong)劑（或離子(zi)化樣(yang)品(pin)）d、更(geng)換壹支(zhi)柱子(zi)）
2、二級保留(liu)效(xiao)應，正(zheng)相(xiang)模式（a、加(jia)入三(san)乙(yi)胺(an)（或堿性(xing)樣(yang)品(pin)）b、加(jia)入乙(yi)酸（或酸性(xing)樣(yang)品(pin)）c、加(jia)入水(shui)（或多(duo)官(guan)能(neng)團(tuan)化合物(wu)）d、試(shi)用另(ling)壹種方法）
3、二級保留(liu)效(xiao)應，離子(zi)對 (加入三(san)乙(yi)胺(an)（或堿性(xing)樣(yang)品(pin)）)
H、 酸性(xing)或堿性(xing)化合物(wu)的(de)峰(feng)拖(tuo)尾(wei)
1、緩(huan)沖(chong)不(bu)合適(shi)  (a、使用濃度50-100mM的緩(huan)沖(chong)液(ye) b、使(shi)用Pka等(deng)於流動(dong)相(xiang)PH值的緩(huan)沖(chong)液(ye))
I、 額(e)外(wai)的(de)峰(feng)
1、樣(yang)品(pin)中(zhong)有其(qi)他(ta)組份 (正(zheng)常)
2、前(qian)壹次進(jin)樣(yang)的(de)洗脫(tuo)峰(feng)  (a、增加(jia)運行(xing)時(shi)間或梯度斜(xie)率 b、提(ti)高(gao)流速(su))
3、空位(wei)或鬼峰(feng)  (a、檢查流動(dong)相(xiang)是(shi)否純(chun)凈(jing) b、使(shi)用流動(dong)相(xiang)作(zuo)為(wei)樣(yang)品(pin)溶(rong)劑 c、減(jian)少(shao)進(jin)樣(yang)體(ti)積(ji))
J、 保留(liu)時間波(bo)動(dong)
1、溫(wen)控不(bu)當(dang)  (調(tiao)好柱溫(wen))    2、流動(dong)相(xiang)組分變化  (防止變化（蒸發(fa)、反應等(deng)）)
3、色(se)譜柱沒有平衡  (在每(mei)壹次運(yun)行(xing)之前給予足(zu)夠的時(shi)間(jian)平衡色(se)譜柱)
K、 保留(liu)時間不(bu)斷變化
1、流速(su)變化  (重新設定流速(su))    2、泵(beng)中有(you)氣泡  (從(cong)泵(beng)中除去(qu)氣泡)
3、流動(dong)相(xiang)選擇不(bu)恰當(dang)  (a、更(geng)換合適(shi)的流動(dong)相(xiang) b、選擇合(he)適(shi)的混合(he)流動(dong)相(xiang))
L、 基線漂(piao)移(yi)
1、柱溫(wen)波動(dong),即使(shi)是(shi)很(hen)小的溫度變化都(dou)會(hui)引起基線(xian)的波動(dong)。通(tong)常影響(xiang)示(shi)差(cha)檢測(ce)器、電導檢測(ce)器、較低(di)靈敏度的紫外檢(jian)測(ce)器或其(qi)它(ta)光(guang)電類檢測(ce)器。  (控制好(hao)柱子(zi)和(he)流動(dong)相(xiang)的溫度，在檢(jian)測(ce)器之前使用熱(re)交換器圖)
2、流動(dong)相(xiang)不(bu)均(jun)勻(yun),流動(dong)相(xiang)條(tiao)件變化引起的基(ji)線漂移(yi)大(da)於溫度導致(zhi)的漂(piao)移(yi)。(使用HPLC級的溶劑，高(gao)純(chun)度的鹽(yan)和(he)添加劑。流動(dong)相(xiang)在使用前(qian)進行(xing)脫(tuo)氣，使用中(zhong)使用氦氣。)
3、流通(tong)池(chi)被(bei)汙(wu)染(ran)或有(you)氣體 (用甲(jia)醇或其(qi)他(ta)強(qiang)極性(xing)溶劑(ji)沖(chong)洗流通(tong)池(chi)。如有需(xu)要(yao)，可(ke)以(yi)用1M的(de)硝酸。（不(bu)要(yao)用鹽(yan)酸）)
4、檢(jian)測(ce)器出口阻塞(sai),高壓造(zao)成流通(tong)池(chi)窗口(kou)破(po)裂(lie)，產(chan)生噪(zao)音基(ji)線(xian) (取出阻塞(sai)物(wu)或更(geng)換管子(zi)。參(can)考(kao)檢(jian)測(ce)器手冊更(geng)換流通(tong)池(chi)窗)
5、流動(dong)相(xiang)配比不(bu)當(dang)或流速(su)變化 (更(geng)改(gai)配比或流速(su),定期檢查流動(dong)相(xiang)組成及(ji)流速(su))
6、柱平衡慢，特(te)別是(shi)流動(dong)相(xiang)發生變化時 (用中(zhong)等(deng)強度的溶(rong)劑(ji)進行沖(chong)洗，更(geng)改(gai)流動(dong)相(xiang)時，在分析(xi)前用10-20倍體積(ji)的(de)新(xin)流動(dong)相(xiang)對柱子(zi)進行沖(chong)洗)
7、流動(dong)相(xiang)汙染(ran)、變質或由(you)低(di)品(pin)質溶劑配(pei)成(cheng) （檢(jian)查流動(dong)相(xiang)的組成。使用高(gao)品質(zhi)的化學試(shi)劑及(ji)HPLC級的溶劑）
8、樣(yang)品(pin)中(zhong)有強(qiang)保留(liu)的物(wu)質(zhi)（高K’值）以(yi)饅頭(tou)峰(feng)樣(yang)被(bei)洗脫(tuo)出(chu)，從而(er)表(biao)現(xian)出(chu)壹個逐步升高(gao)的基(ji)線。（使用保護(hu)柱，如(ru)有必要(yao)，在(zai)進(jin)樣(yang)之間或在(zai)分析(xi)過程中(zhong)，定(ding)期用強(qiang)溶劑(ji)沖(chong)洗柱子(zi)）
9、使用循(xun)環(huan)溶劑(ji)，但(dan)檢(jian)測(ce)器未調(tiao)整（重新設定基(ji)線(xian)。當(dang)檢測(ce)器動(dong)力(li)學範(fan)圍發生變化時，使用新(xin)的流動(dong)相(xiang)）
10、檢測(ce)器沒有設(she)定在(zai)zui大(da)吸收(shou)波(bo)長處。（將波(bo)長調(tiao)整至zui大(da)吸收(shou)波(bo)長處）

采(cai)用反(fan)相(xiang)色(se)譜法分離弱酸（3≤pKa≤7）或弱堿（7≤pKa≤8）樣(yang)品(pin)時(shi)，通過(guo)調(tiao)節流動(dong)相(xiang)的pH值，以(yi)抑制(zhi)樣(yang)品(pin)組分的(de)解(jie)離，增(zeng)加(jia)組分在(zai)固(gu)定(ding)相(xiang)上(shang)的保留(liu)，並改(gai)善峰(feng)形(xing)的技術(shu)稱(cheng)為(wei)反(fan)相(xiang)離子(zi)抑(yi)制技術(shu)。對於弱酸，流動(dong)相(xiang)的pH值越小，組分的(de)k值(zhi)越大(da)，當(dang)pH值遠(yuan)遠小於弱酸的(de)pKa值(zhi)時，弱酸主要(yao)以(yi)分子(zi)形(xing)式存在；對弱堿，情況相(xiang)反。分析(xi)弱酸樣(yang)品(pin)時(shi)，通常在(zai)流動(dong)相(xiang)中加入(ru)少(shao)量弱酸，常用50mmol/L磷(lin)酸鹽(yan)緩(huan)沖(chong)液(ye)和(he)1%醋酸溶(rong)液(ye)；分析(xi)弱堿樣(yang)品(pin)時(shi)，通常在(zai)流動(dong)相(xiang)中加入(ru)少(shao)量弱堿，常用50mmol/L磷(lin)酸鹽(yan)緩(huan)沖(chong)液(ye)和(he)30mmol/L三(san)乙(yi)胺(an)溶液(ye)。

註：流動(dong)相(xiang)中加入(ru)有機胺(an)可(ke)以(yi)減弱堿性(xing)溶質(zhi)與殘(can)余矽醇基的(de)相(xiang)互作(zuo)用，減(jian)輕(qing)或消(xiao)除峰(feng)拖(tuo)尾(wei)現象。所(suo)以(yi)在這(zhe)種情況下(xia)有機胺(an)（如三(san)乙(yi)胺(an)）又稱(cheng)為(wei)減(jian)尾(wei)劑或除尾(wei)劑。