細胞(bao)培養(yang)實驗(yan)

細胞(bao)培養(yang)（cell culture）是指在(zai)體外(wai)模擬(ni)體內環境（無菌(jun)、適(shi)宜(yi)溫度、酸(suan)堿度和(he)壹定(ding)營(ying)養(yang)條件(jian)等），使(shi)之生存、生長(chang)、繁(fan)殖(zhi)並(bing)維持主(zhu)要結構和功能的壹種(zhong)方(fang)法。細胞(bao)培養(yang)也(ye)叫(jiao)細(xi)胞(bao)克(ke)隆(long)技術(shu)，在(zai)生物學中的正規(gui)名詞(ci)為細胞(bao)培養(yang)技術(shu)。不(bu)論對於(yu)整(zheng)個(ge)生(sheng)物工程技(ji)術(shu)，還是其(qi)中之壹的生物克隆(long)技術(shu)來說，細胞(bao)培養(yang)都是壹個(ge)關(guan)鍵(jian)的過程，細(xi)胞(bao)培養(yang)本身(shen)就是細(xi)胞(bao)的大(da)規(gui)模克(ke)隆(long)。細胞(bao)培養(yang)技術(shu)可以(yi)由(you)壹個(ge)細(xi)胞(bao)經(jing)過大(da)量培養(yang)成為(wei)簡(jian)單的單細胞(bao)或極少分化的多細(xi)胞(bao)，這是(shi)克隆(long)技術(shu)必要的環節，而且細(xi)胞(bao)培養(yang)本身(shen)就是細(xi)胞(bao)的克隆(long)。細胞(bao)培養(yang)技術(shu)是(shi)細胞(bao)生(sheng)物學研(yan)究方(fang)法中重(zhong)要(yao)和(he)常(chang)用技(ji)術(shu)，通(tong)過細(xi)胞(bao)培養(yang)既(ji)可以(yi)獲(huo)得(de)大(da)量細胞(bao)，又(you)可以(yi)借(jie)此(ci)研(yan)究細(xi)胞(bao)的信號(hao)轉(zhuan)導(dao)、細(xi)胞(bao)的合成(cheng)代(dai)謝、細胞(bao)的生長(chang)增(zeng)殖(zhi)等(deng)。

細胞(bao)培養(yang)實驗(yan)室組(zu)建(jian)的基本要(yao)求:

1、細(xi)胞(bao)培養(yang)是壹種(zhong)無(wu)菌(jun)操(cao)作(zuo)技術(shu)，要(yao)求工作(zuo)環境和條件(jian)必須保(bao)證(zheng)無(wu)微(wei)生物汙(wu)染(ran)和不(bu)受(shou)其它有害(hai)因素的影響。

2、細(xi)胞(bao)培養(yang)室和(he)設(she)計(ji)原則是防(fang)止(zhi)微(wei)生物汙(wu)染(ran)和有害(hai)因素影(ying)響，要(yao)求工作(zuo)環境清潔(jie)、空(kong)氣清新，幹(gan)燥和無煙(yan)塵(chen)。

3、細(xi)胞(bao)培養(yang)室的設計(ji)原則壹般是(shi)無(wu)菌(jun)操(cao)作(zuo)區設(she)在(zai)室內(nei)較(jiao)少走動的內側，常(chang)規(gui)操(cao)作(zuo)和封(feng)閉(bi)培養(yang)於壹室，為(wei)10萬(wan)級潔(jie)凈(jing)環境的潔凈(jing)室。而洗刷消毒(du)工作(zuo)設在(zai)潔凈(jing)室外(wai)，避(bi)免(mian)物品(pin)汙(wu)染(ran)潔凈(jing)室內(nei)環境。細胞(bao)潔(jie)凈(jing)室需(xu)要(yao)壹個(ge)空(kong)調(tiao)系(xi)統(tong)並對外(wai)界保(bao)持壹定(ding)的正壓(ya)。

4、解(jie)剖(pou)實驗(yan)室主(zhu)要(yao)用於對器(qi)官組(zu)織的分離，需(xu)要(yao)有無(wu)菌(jun)操(cao)作(zuo)臺、解(jie)剖(pou)顯微(wei)鏡、各(ge)種(zhong)手(shou)術(shu)器(qi)材(cai)等組(zu)織細(xi)胞(bao)培養(yang)室除壹般實(shi)驗(yan)室的普(pu)通(tong)常(chang)規(gui)設備(bei)外，尚有壹些(xie)特殊(shu)需(xu)要(yao)的設備(bei)。基本可分為兩大(da)類(lei)：
 
I. 細胞(bao)培養(yang)實驗(yan)室常(chang)用的基本儀(yi)器(qi)設(she)備

1.顯微(wei)鏡：倒(dao)置(zhi)顯微(wei)鏡——是(shi)組(zu)織細(xi)胞(bao)培養(yang)室所(suo)必需(xu)的日常(chang)工作(zuo)常(chang)規(gui)使(shi)用設(she)備之壹，便(bian)於(yu)掌握細胞(bao)的生長(chang)情(qing)況(kuang)並觀察(cha)有無(wu)汙(wu)染(ran)等。

2.培養(yang)箱：體(ti)外培養(yang)的細胞(bao)和(he)體(ti)內(nei)細胞(bao)壹樣(yang)，需(xu)要(yao)在(zai)恒定(ding)的溫度下(xia)生存，大(da)多數情(qing)況(kuang)下(xia)，最(zui)適溫度是(shi)37℃，溫差變化壹般不(bu)應超(chao)過±0.5℃，細(xi)胞(bao)在(zai)溫度升高(gao)2℃ 時(shi)，持續(xu)數小(xiao)時(shi)即不(bu)能耐(nai)受(shou)，40℃以(yi)上(shang)將很(hen)快(kuai)死亡(wang)。因此需(xu)要(yao)有能控制(zhi)溫度的培養(yang)箱，如(ru)具(ju)有較(jiao)高靈敏(min)度的恒溫培養(yang)箱及(ji)CO2培養(yang)箱。

3.幹(gan)燥箱：用於(yu)細(xi)胞(bao)培養(yang)箱的有些(xie)器(qi)械、器(qi)皿(min)需(xu)要(yao)烘(hong)幹(gan)後才能使(shi)用，玻(bo)璃(li)器(qi)皿(min)等須幹(gan)熱(re)消(xiao)毒(du)。

4.水純(chun)化裝(zhuang)置(zhi)：細胞(bao)培養(yang)對水的質(zhi)量要求(qiu)較(jiao)高，細(xi)胞(bao)培養(yang)以(yi)及(ji)與(yu)細胞(bao)培養(yang)工作(zuo)相(xiang)關(guan)的液(ye)體(ti)的配(pei)制(zhi)用(yong)水必須事先嚴(yan)格(ge)純(chun)化處(chu)理(li)。進(jin)行細胞(bao)培養(yang)時(shi)配(pei)制(zhi)各(ge)種(zhong)培養(yang)液(ye)及(ji)試劑等均(jun)需(xu)使(shi)用三(san)次蒸(zheng)餾水：即使(shi)是用(yong)於玻(bo)璃(li)器(qi)皿(min)的沖洗，也(ye)應(ying)使(shi)用二(er)次以(yi)上(shang)蒸(zheng)餾水。

5.冰箱：細(xi)胞(bao)培養(yang)室必須配(pei)備(bei)。
a、普(pu)通(tong)冰箱或冷(leng)藏櫃——儲存(cun)培養(yang)液(ye)、生(sheng)理(li)鹽(yan)水等(deng)培養(yang)用的物品(pin)及(ji)短期保(bao)存(cun)組(zu)織標(biao)本。
b、低(di)溫冰箱（-20℃）——用(yong)於儲(chu)存(cun)需(xu)要(yao)冷(leng)凍(dong)保(bao)存(cun)生(sheng)物活(huo)性及(ji)較(jiao)長時(shi)期(qi)存放的制劑(ji)，如(ru)酶(mei)、血清等。

6.細胞(bao)冷(leng)凍(dong)儲(chu)存(cun)器(qi)：儲(chu)存器(qi)常(chang)用的是液(ye)氮(dan)容器(qi)。根(gen)據(ju)使(shi)用需(xu)要(yao)分為不(bu)同的類(lei)型及(ji)多種(zhong)規(gui)格(ge)。選擇(ze)購(gou)置(zhi)液(ye)氮(dan)容器(qi)時(shi)要(yao)綜合考(kao)慮容(rong)積(ji)大(da)小(xiao)，取放(fang)使(shi)用方(fang)便及(ji)液(ye)氮(dan)揮發量（經濟）三(san)種(zhong)因素。

7.離心機：進(jin)行細胞(bao)培養(yang)時(shi)，常(chang)規(gui)需(xu)要(yao)進(jin)行制備(bei)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)、調(tiao)整(zheng)細胞(bao)密度、洗滌、收集(ji)細(xi)胞(bao)等(deng)工(gong)作(zuo)，通(tong)常(chang)需(xu)要(yao)使(shi)用實(shi)驗室離心機。壹般可常(chang)規(gui)配(pei)置(zhi)4000rpm的臺式(shi)離心機，例如(ru)細(xi)胞(bao)沈(chen)降，使(shi)用低(di)速離心機即可，離心力(li)過大(da)有時(shi)可能引(yin)起細(xi)胞(bao)的損傷。

8.天(tian)平(ping)：常(chang)用的有扭(niu)力(li)天(tian)平(ping)、精(jing)密天(tian)平(ping)及(ji)各種(zhong)電(dian)子(zi)天(tian)平(ping)。

9.消(xiao)毒(du)器(qi)：壹般為(wei)高(gao)壓蒸(zheng)汽(qi)滅(mie)菌(jun)鍋，直(zhi)接或間(jian)接(jie)與(yu)細胞(bao)接(jie)觸(chu)的物品(pin)均(jun)需(xu)消(xiao)毒(du)滅(mie)菌(jun)處(chu)理(li)。

10.濾(lv)器(qi)：目(mu)前細(xi)胞(bao)培養(yang)工作(zuo)中采用的培養(yang)用液(ye)，包(bao)括(kuo)人(ren)工(gong)合成(cheng)培養(yang)液(ye)、血(xue)清、消(xiao)化(hua)用(yong)胰酶(mei)等常(chang)含有維(wei)生(sheng)素(su)、蛋(dan)白、多(duo)肽(tai)、生(sheng)長因子等(deng)物質(zhi)，這些(xie)物質(zhi)在(zai)高溫或射線照(zhao)射下(xia)易發生(sheng)變性或失去功能，因而上述(shu)液(ye)體(ti)多采用濾(lv)過消(xiao)毒(du)以(yi)除去細菌(jun)。目(mu)前常(chang)使(shi)用的濾(lv)器(qi)有玻(bo)璃(li)濾(lv)器(qi)和(he)微(wei)孔(kong)濾(lv)器(qi)，各(ge)種(zhong)濾(lv)器(qi)有其(qi)使(shi)用原理(li)和(he)特點(dian)。