純(chun)水(shui)服務(wu)於(yu)流(liu)式(shi)細(xi)胞(bao)技術進(jin)行植(zhi)物生(sheng)殖(zhi)細(xi)胞(bao)學(xue)研究(jiu)

流式(shi)細(xi)胞(bao)術(shu)的(de)發(fa)展(zhan)
      流(liu)式(shi)細(xi)胞(bao)術(shu)zui初(chu)是開(kai)發(fa)應(ying)用(yong)於(yu)醫(yi)學(xue)領(ling)域的(de)，但是隨後逐漸(jian)演(yan)變成(cheng)了細(xi)胞(bao)計(ji)數(shu)、分(fen)類以(yi)及(ji)生(sheng)物標(biao)記探測(ce)等(deng)不同(tong)領(ling)域內(nei)的(de)有(you)利工具[7]。盡(jin)管(guan)相關(guan)的(de)*篇(pian)采(cai)用流(liu)式(shi)細(xi)胞(bao)術(shu)進(jin)行植(zhi)物細(xi)胞(bao)核(he)分(fen)析(xi)的(de)文(wen)章發(fa)表(biao)於(yu)1973年[8]，但是采(cai)用流(liu)式(shi)細(xi)胞(bao)術(shu)所(suo)開(kai)展的(de)植(zhi)物DNA分(fen)析(xi)在上世(shi)紀(ji)80年代(dai)末才獲得了突飛猛(meng)進的(de)發(fa)展(zhan)，從(cong)此所(suo)有(you)研究(jiu)人(ren)員(yuan)都(dou)開(kai)始堅(jian)定地(di)在(zai)植(zhi)物研究(jiu)領(ling)域使(shi)用(yong)該(gai)項(xiang)技術。基本上，植(zhi)物學(xue)家(jia)都是使用流式(shi)細(xi)胞(bao)術(shu)來(lai)測(ce)定植(zhi)物細(xi)胞(bao)核(he)中的(de)DNA含(han)量。有(you)關(guan)流式(shi)細(xi)胞(bao)術(shu)詳(xiang)細(xi)的(de)原(yuan)理(li)及(ji)應(ying)用(yong)的(de)描(miao)述(shu)，請(qing)參閱參考文(wen)獻(xian)9。

      圖2a概括(kuo)表(biao)示了流式(shi)細(xi)胞(bao)儀如(ru)何通(tong)過(guo)電子檢測(ce)設備(bei)用壹(yi)束水(shui)動力集中的(de)液體流對(dui)經染(ran)色的(de)或靶向(xiang)的(de)粒(li)子（尺寸(cun)介(jie)於(yu)0.2μm-150μm[7]）進(jin)行懸浮(fu)排列。在植(zhi)物研究(jiu)中，先(xian)用(yong)熒(ying)光標(biao)記物(wu)（比(bi)如(ru)：DAPI[4’,6-二脒(mi)基-2-苯(ben)基吲哚(duo)]或碘化(hua)丙(bing)啶）對(dui)細(xi)胞(bao)核(he)（比(bi)如(ru)：粒子）進行染色(se)。然(ran)後(hou)，每壹(yi)個懸浮(fu)的(de)細(xi)胞(bao)核(he)暴(bao)露於(yu)光(guang)束（通(tong)常為激(ji)光或UV燈光(guang)）之(zhi)中，於(yu)是光的(de)路徑(jing)被(bei)分(fen)散並(bing)由檢(jian)測(ce)器感知(zhi)，用於(yu)分(fen)析(xi)每壹(yi)個單(dan)獨(du)粒子的(de)熒(ying)光強(qiang)度(du)，為(wei)核(he)酸(suan)中(zhong)DNA含(han)量的(de)測(ce)定提(ti)供信(xin)息(xi)。成(cheng)千(qian)上萬個完(wan)整(zheng)細(xi)胞(bao)核(he)的(de)合並(bing)數據可(ke)為單(dan)獨(du)組織(zhi)的(de)DNA含(han)量提(ti)供信(xin)息(xi)（參見(jian)圖1中(zhong)的(de)波(bo)峰(feng)）。由於(yu)每壹(yi)秒鐘幾乎(hu)會同(tong)時(shi)進(jin)行分(fen)析(xi)多達數(shu)千(qian)個粒(li)子的(de)物(wu)理(li)和/或化(hua)學(xue)特(te)征(zheng)，因此(ci)用於(yu)樣(yang)品分(fen)離和樣(yang)品檢(jian)測(ce)的(de)溶(rong)液的(de)質量和純(chun)度(du)非(fei)常關(guan)鍵。

      如(ru)果使(shi)用的(de)是低品質或不合適(shi)的(de)水(shui)供應(ying)系(xi)統(tong)，則出(chu)現的(de)不屬(shu)於(yu)樣(yang)品的(de)汙(wu)染(ran)物(wu)顆(ke)粒會發(fa)生(sheng)熒(ying)光反(fan)應(ying)並(bing)產(chan)生(sheng)“噪聲"，這(zhe)會幹擾(rao)檢(jian)測(ce)結果並(bing)導致(zhi)zui終(zhong)錯(cuo)誤的(de)評估(gu)。因此(ci)，實驗時(shi)必(bi)須(xu)要(yao)使用高品(pin)質的(de)超(chao)純(chun)水(shui)。

超(chao)純(chun)水(shui)系(xi)統(tong)生(sheng)產的(de)超(chao)純(chun)水(shui)達到ASTM I級(ji)品(pin)質
      能(neng)夠(gou)生(sheng)產出(chu)達到ASTM I級(ji)品(pin)質超(chao)純(chun)水(shui)的(de)超(chao)純(chun)水(shui)系(xi)統(tong)由賽(sai)多利斯（哥廷根(gen)，德(de)國）提(ti)供。使用(yong)arium? pro VF水(shui)系(xi)統(tong)生(sheng)產的(de)超(chao)純(chun)水(shui)（ArUPH2O）進行流式(shi)細(xi)胞(bao)分(fen)析(xi)，為了評估(gu)超(chao)純(chun)水(shui)對(dui)分(fen)析(xi)結果的(de)質量所(suo)產(chan)生(sheng)的(de)影(ying)響，作(zuo)者檢查了兼性孤雌生(sheng)殖(zhi)的(de)被(bei)子植(zhi)物用於(yu)生(sheng)產種(zhong)子的(de)繁(fan)殖(zhi)途(tu)徑。這是通過(guo)比(bi)較分(fen)別(bie)采(cai)用ArUPH2O和標(biao)準鞘(qiao)液溶液（0.04%*， 0, 01%去(qu)汙(wu)劑(ji)）對(dui)樣品進(jin)行檢測(ce)所(suo)獲(huo)得的(de)結(jie)果而(er)實現的(de)（Partec GmbH）。

      arium? pro VF系(xi)統(tong)（圖3）從(cong)經過(guo)預(yu)處理(li)的(de)飲(yin)用(yong)水(shui)中通過(guo)去(qu)除(chu)所(suo)有(you)汙染(ran)微粒(li)而生(sheng)產出(chu)超(chao)純(chun)水(shui)。超(chao)純(chun)水(shui)的(de)生(sheng)產需(xu)要持續(xu)循環和壹(yi)個恒(heng)定的(de)水(shui)流(liu)速率，這可(ke)以(yi)通(tong)過(guo)壹(yi)個帶壓力控(kong)制功(gong)能的(de)泵(beng)系(xi)統(tong)來實(shi)現。在(zai)進(jin)水(shui)端口(kou)和下(xia)遊端(duan)口(kou)，或者產水端口(kou)進行電導率的(de)測(ce)定。

      本文(wen)所(suo)描(miao)述的(de)測(ce)試(shi)用arium? pro VF水(shui)系(xi)統(tong)（老(lao)壹(yi)代(dai)與當前的(de)新(xin)壹(yi)代(dai)arium? pro VF水系(xi)統(tong)有(you)著*相同(tong)的(de)技術設(she)計，如(ru)圖3所(suo)示(shi)）通過(guo)兩(liang)支(zhi)不同(tong)的(de)濾(lv)芯(xin)來工作(zuo)。這兩(liang)支(zhi)濾(lv)芯(xin)裝(zhuang)填(tian)有(you)特(te)殊(shu)的(de)活(huo)性炭吸(xi)附劑和混(hun)床離(li)子交換樹(shu)脂，用(yong)以(yi)生(sheng)產總有(you)機活(huo)性炭（TOC）含(han)量極(ji)低的(de)超(chao)純(chun)水(shui)。此外，系(xi)統(tong)還有(you)壹(yi)個集成(cheng)的(de)UV燈，在(zai)波(bo)長(chang)為(wei)185nm和254nm時(shi)分(fen)別(bie)具有(you)氧化(hua)有(you)機物(wu)和殺(sha)菌效(xiao)果。

      除(chu)此之(zhi)外，arium? pro VF超(chao)純(chun)水(shui)系(xi)統(tong)有(you)壹(yi)個內(nei)置(zhi)的(de)作(zuo)為切向流(liu)過(guo)濾(lv)器使(shi)用(yong)的(de)超(chao)濾(lv)模(mo)塊。該(gai)過(guo)濾(lv)器中(zhong)整(zheng)合的(de)超(chao)濾(lv)膜可(ke)截留(liu)膠(jiao)體、微生(sheng)物、內(nei)毒素、RNA以(yi)及(ji)DNA等(deng)。出(chu)水端(duan)口(kou)安裝(zhuang)有(you)壹(yi)個0.2μm的(de)終(zhong)端(duan)過(guo)濾(lv)器，用(yong)以(yi)去(qu)除(chu)超(chao)純(chun)水(shui)生(sheng)產後(hou)分(fen)配過(guo)程(cheng)中(zhong)的(de)微(wei)粒(li)和細(xi)菌(jun)。該(gai)設(she)備(bei)生(sheng)產純(chun)水(shui)的(de)工藝(yi)流(liu)程(cheng)請參閱圖(tu)4。

材(cai)料與(yu)方法(fa)
      種子樣品(pin)來源(yuan)於(yu)六倍體毛茛屬植(zhi)物，在自(zi)由授(shou)粉的(de)條件下(xia)進行挑選(xuan)收集。種子個體在塑(su)料有(you)蓋(gai)培(pei)養(yang)皿內(nei)用(yong)300μl的(de)提(ti)取(qu)緩(huan)沖(chong)液（CyStain UV Precise P, Partec GmbH）進行碾(nian)碎(sui)，然(ran)後(hou)在(zai)室(shi)溫(wen)下(xia)孵育10分(fen)鐘，再將(jiang)細(xi)胞(bao)核(he)過(guo)濾(lv)（30μl漿狀物，CellTric?, Partec GmbH）至(zhi)壹(yi)個5-mL的(de)塑(su)料(liao)管(guan)中(zhong)。而(er)後(hou)，加入1.2mL染色(se)緩(huan)沖(chong)液（CyStain UV Precise P），60秒後(hou)，樣品(pin)進(jin)入流(liu)式(shi)細(xi)胞(bao)儀（CyFlow Space，Partec GmbH；參(can)見(jian)圖2b）的(de)藍(lan)色(se)熒(ying)光通(tong)道(dao)進行分(fen)析(xi)。更多內容(rong) ?

結(jie)果
      總共(gong)有(you)61個單(dan)獨(du)種子重建(jian)了繁(fan)殖(zhi)途(tu)徑。根據建(jian)議(yi)的(de)標(biao)準(zhun)程(cheng)序，30個種(zhong)子使用(yong)鞘(qiao)液懸浮(fu)，31個種(zhong)子使用(yong)ArUPH2O（電導率： 0.055μs/cm或18.2MΩ×cm電阻補(bu)償(chang)至(zhi)25℃）懸浮(fu)。平均每個樣(yang)品(pin)測(ce)試(shi)了2329個細(xi)胞(bao)核(he)，占總計(ji)數(shu)粒子的(de)73%，而(er)其(qi)它27%表(biao)現為(wei)細(xi)胞(bao)周(zhou)期(qi)G2階(jie)段(duan)的(de)細(xi)胞(bao)核(he)或者背景信(xin)號(hao)。針(zhen)對(dui)所(suo)有(you)被(bei)分(fen)析(xi)的(de)種(zhong)子，全部要根據每個峰(feng)所(suo)富集的(de)平均總數(shu)來(lai)計算(suan)胚(pei)胎(tai)和胚(pei)乳(ru)的(de)平均峰位置(zhi)。更多內容(rong) ?

討(tao)論
      總之(zhi)，所(suo)獲(huo)得的(de)測(ce)試(shi)結果中(zhong)具有(you)極(ji)小的(de)差(cha)異(yi)，這(zhe)證(zheng)實(shi)了arium系(xi)統(tong)是適用於(yu)植(zhi)物材(cai)料相對(dui)倍性(xing)分(fen)析(xi)的(de)快速又經濟(ji)的(de)選(xuan)擇。高品質的(de)arium超(chao)純(chun)水(shui)水被(bei)證(zheng)明用(yong)於(yu)實(shi)現流(liu)失(shi)細(xi)胞(bao)種(zhong)子篩選(xuan)技術上的(de)可(ke)重現結(jie)果是非常有(you)效的(de)。盡(jin)管(guan)如(ru)此，由於(yu)抗(kang)生(sheng)素和去(qu)汙(wu)劑(ji)之(zhi)類的(de)添(tian)加劑具有(you)可(ke)阻止生(sheng)物膜的(de)形成(cheng)，以(yi)及(ji)增加容(rong)器、管(guan)道(dao)、閥門以(yi)及(ji)流動腔內(nei)表(biao)面的(de)濕度(du)等(deng)作(zuo)用，對(dui)流失細(xi)胞(bao)系(xi)統(tong)的(de)可(ke)靠操作(zuo)會造(zao)成(cheng)長(chang)期(qi)或短期(qi)的(de)正(zheng)面(mian)影(ying)響，因此(ci)供應(ying)商(shang)壹(yi)般會建(jian)議(yi)在(zai)自(zi)制的(de)鞘(qiao)液中添(tian)加此類物(wu)質。

      簡(jian)而(er)言之(zhi)，ArUPH2O可(ke)即(ji)時(shi)用(yong)於(yu)植(zhi)物細(xi)胞(bao)的(de)流(liu)式(shi)細(xi)胞(bao)技術。由於(yu)流(liu)失細(xi)胞(bao)技術在(zai)其它應(ying)用(yong)中(zhong)越(yue)來越(yue)重要(yao)，比(bi)如(ru)腫瘤(liu)細(xi)胞(bao)的(de)檢(jian)測(ce)，細(xi)胞(bao)的(de)定量測(ce)定與(yu)形態分(fen)化(hua)，細(xi)胞(bao)周(zhou)期(qi)分(fen)析(xi)，DNA-RNA含(han)量估(gu)算(suan)，以(yi)及(ji)雕亡檢(jian)測(ce)等(deng)等(deng)，ArUPH2O的(de)全面適(shi)用(yong)性為arium超(chao)純(chun)水(shui)在壹(yi)系(xi)列(lie)使(shi)用(yong)流式(shi)細(xi)胞(bao)術(shu)的(de)新(xin)興技術中(zhong)的(de)應(ying)用(yong)創(chuang)造(zao)了新機會(hui)。